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Autores: Aguirre Alejandro, Conde Dario, Guallasamín María & Vizuete Vanesa. (1) 1. Universidad Central del Ecuador, Facultad de Ciencias Agrícolas, Carrera de Agronomía Genética Vegetal 2021-2021

Contenido del Video: Proceso de extracción casera de ADN de una muestra de KIWI, fundamento, preparación de la muestra, preparación de un tampón de lisis casero, diferenciación de interfases y extracción de ADN. Conclusiones.

FUNDAMENTO TEÓRICO

El ADN o también conocido como la molécula de la vida ha sido uno de los descubrimientos más fundamentales dentro del progreso de la humanidad, descubierto por Watson y Crick, fue la tea para la realización de otros experimentos orientados a definir dicho material como aquel que conserva a modo de una codificación, las instrucciones para el correcto ensamblaje de las proteínas, enzimas, hormonas, etc., que conforman a un ser vivo. Con el descubrimiento de esta molécula y la correcta comprensión de sus estructuras, ya sea como un polinucleótido, o como una doble hélice antiparalela; los conocimientos adquiridos por parte de la biología molecular y la bioquímica, facilitaron al ser humano la capacidad de extraer su propio material genético para estudiarlo y generar protocolos que cuantifiquen bajo ciertos parámetros específicos la cantidad y pureza de dicho material, en pro de mejorar así cada vez las técnicas, hasta llegar al nivel en el que el ADN pueda ser extraído de maneras caseras y económicas, no obstante, todas las técnicas se encuentran sujetas bajo principios científicos producto de muchas ciencias integradoras que permiten a quien realiza dicha práctica, hondar más en el rol e importancia del ADN dentro de los seres vivos.

Dentro de las diversas técnicas ideadas por el ser humano para una correcta extracción, todas y cada una de ellas tiene como objetivo, ejercer procesos de homogenización de los tejidos que se buscan extraer mediante la inducción de las células a la lisis, consiguiéndose esta por medio de maceraciones o uso de agentes químicos; del mismo modo uno de los pasos en común consiste en la liberación del ADN dentro de la célula con el uso de agentes de detergencia entre otros que a la par consiguen la destrucción de proteínas que compactan las hebras del ADN, para que de este modo, finalmente este pueda ser visible.

Materiales

Material biológico

Frutos frescos de frutilla (de preferencia refrigerados), 100 gramos

Piña (solo el eje no comestible de la piña), 20 gramos.

Materiales	Equipos	Reactivos
Olla	BalanzaLicuadora	Agua destilada
Taza para medir	Termómetro	Sal
Papel filtro o colador	Mortero	Jabón de cocina líquido
Un frasco o pequeño o tubo de ensayo	Estufa	Alcohol 70% o más. Hielos
EmbudoBolsa de plástico herméticaGotero

Métodos

Todos los procedimientos de extracción de ADN ya sean caseros o a nivel de laboratorio, buscan la obtención del material genético a partir de tejidos jóvenes y en refrigeración con fines de evitar la degradación de las moléculas de ADN. Todas las técnicas de extracción de ADN constan de los siguientes pasos:

1. Las muestras jóvenes y refrigeradas, son sometidas a métodos de extracción física que induzcan a las células que componen el material vegetal a la lisis como un medio principal de separar las células unas de otras, así como las uniones de la pared celular, en un proceso conocido como homogenización mediante la trituración con el mortero.
2. Una vez conseguido esto se procede a la destrucción otras moléculas que encierran al ADN, como las moléculas presentes en las membranas celulares, para lo cual, al producto macerado se le realiza un tratamiento con agentes detergentes, dichos agentes vienen conjuntamente en soluciones jabonosas, de modo que, los agentes presentes en el jabón liberan los componentes de la membrana celular.
3. Todo el producto resultante del procedimiento anterior, es llevado a un tratamiento de calor mediante un baño maría, para facilitar el proceso de la rotura de otras proteínas de la membrana o que contienen al ADN.

• Una vez realizado esto, se procede a la separación de residuos de la extracción, así como finalmente de otras moléculas que interfieran con la visibilidad de las hebras de ADN, para esto se usan varios métodos que comprenden métodos físicos como químicos, en el último caso estos tienden a precipitar el material genético o cambiar ligeramente su naturaleza química para que no se unan otras moléculas.

Desarrollo de la práctica

Previo a la extracción de ADN:

1. La noche anterior a la extracción del ADN preparar cubos de hielo suficientes para someter a un baño frío, las muestras que deseamos extraer su material genético.
2. Con dos horas de anticipo a la extracción, tomamos 50 ml de Alcohol en un frasco y lo sometemos a refrigeración.
3. Con la olla y las estufa, preparar el baño maría 10 minutos antes de la práctica y con el uso del termómetro, medir la temperatura para que oscile en rangos de temperatura de entre los 50-60 °C.
4. Preparar la solución de extracción y zumo de piña.

Pasos para la elaboración de la solución de extracción:

1. Con el uso de la balanza pesar 3 gramos de sal de cocina.
2. Con la taza, medir 100 ml de agua destilada y medir en la misma cantidad el jabón líquido de cocina.
3. Mesclamos la sal, jabón y agua destilada en un frasco de manera suave, evitando lo mejor posible la formación de espuma.

Pasos para la preparación del zumo de piña:

1. De la piña, solo se selecciona el eje no comestible de esta o también conocido como “corazón de la piña”.
2. Pesamos 20 gramos de la muestra seleccionada con el uso de la balanza.
3. Con el uso de la licuadora triturar los 30 gramos seleccionados.
4. Filtrar el producto resultante con un papel filtro o un colador.
5. El producto filtrado se selecciona y se lo almacena en refrigeración para su posterior uso en la extracción del ADN.

Extracción del ADN:

1. Pesar con la balanza 100 gramos de frutillas.
2. Colocar la muestra pesada en una funda de plástico hermética (fundas Ziploc)
3. Macerar suavemente los tejidos de las muestras, hasta que todos estos, queden a modo de una pasta homogenizada.
4. Depositamos el producto macerado en un vaso de vidrio con capacidad basta para colocar 50 ml de la solución de extracción.
5. Removemos lentamente el producto macerado con la solución evitando nuevamente, formaciones de espuma o burbujas.
6. Someter al vaso de vidrio al tratamiento de baño maría por un tiempo prudencial de 15 minutos, removiendo lentamente la muestra durante todo el procedimiento y evitando que el agua hierva.
7. En un recipiente, vertemos un poco de agua y colocamos hielo.
8. Transcurrido el tiempo de la muestra en el baño maría, sacamos al vaso con cuidado y esperamos un tiempo prudencial a que se enfríe lo suficiente el vaso.
9. En un recipiente, vertemos un poco de agua y colocamos hielo.
10. Transcurrido el tiempo de la muestra en el baño maría, sacamos al vaso con cuidado y esperamos un tiempo prudencial a que se enfríe lo suficiente el vaso.
11. El vaso ya enfriado es colocado en el recipiente de agua con hielos durante cinco minutos (mucho cuidado con no enfriar lo necesario el vaso, caso contrario al colocarlo en el recipiente con hielos, corres el riesgo de que el vidrio se rompa en el proceso).
12. Transcurrido el tiempo, verter todo el contenido del vaso a un colador o en caso de tener un embudo y papel filtro, filtrar de dicha manera.
13. El producto filtrado es trasladado a un frasco pequeño o en su defecto a un tubo de ensayo.
14. Tomar 1 ml del zumo de piña con el gotero y añadir lentamente al recipiente que contenga el filtrado de las frutillas y esperamos un tiempo de 2 minutos.
15. Colocar el alcohol frio lentamente en las paredes del frasco que contenga la solución resultante del paso anterior, las proporciones del alcohol deben de ser similares a en las que se encuentra la solución de interés.
16. Esperar unos minutos hasta que sea posible la observación de unas finas hebras de color blanco, dichas hebras son en ADN que se desea observar.

Recursos didácticos:

Para mayor información acerca de la extracción del ADN de manera casera, recurrir a los siguientes recursos didácticos.

http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/acym/Extraccion_de_ADN.pdf

http://www.comoves.unam.mx/assets/revista/37/guiadelmaestro_37.pdf

http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf

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